本文目录一览：
- 1、bradford法和lowry法是什么法
- 2、考马斯亮蓝法测蛋白质含量
- 3、bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
- 4、测定蛋白质含量的方法有哪些，其原理各是什么。
- 5、考马斯亮蓝法的干扰因素
- 6、什么是考马斯亮蓝法（Bradford法）？ 生物化学实验中常用的一种鉴定方法!
- 7、（Bradford法）如何测定蛋白浓度？
- 8、bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
- 9、bradford法测定蛋白质含量的优点有哪些？
bradford法和lowry法是什么法
1、bradford法
1976年由bradford建立的考马斯亮兰法（bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰g-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）。和芳香族氨基酸残基相结合。 在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
2、lowry法，就是Folin---酚法测定蛋白质含量。
磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应。蛋白质中含有代酚基的酪氨酸，故有此反应。Folin---酚法的灵敏度是双缩脲法的100倍。
lowry法，就是Folin---酚法测定蛋白质含量。
磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应。蛋白质中含有代酚基的酪氨酸，故有此反应。Folin---酚法的灵敏度是双缩脲法的100倍。
bradford法
1976年由bradford建立的考马斯亮兰法（bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰g-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）。和芳香族氨基酸残基相结合。 在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
bradford和lowry两者都是生物检验的化学试剂。
bradford法，也称考马斯蓝染色法（coomassie blue staining）。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在 465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0～100μg/ml)，蛋白质-色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1h内保持稳定。该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。
Lowry法是双缩脲法和福林酚法的结合与发展，其原理是：蛋白质溶液用碱性铜溶液处理，形成铜-蛋白质的络合盐，再加入酚试剂后，除使肽链中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等显色外，还使双缩脲法中肽键、碱性铜的显色效果更强烈。因此，Lowry法的显色效果比单独使用酚试剂强烈3～15倍，为双缩脲法100 倍。由于肽键显色效果增强，从而减小了因蛋白质种类引起的偏差。Lowry法的试剂由两部分组成，试剂甲相当于双缩脲试剂(碱性铜溶液)，可与蛋白质中的肽键起显色反应；试剂乙为磷钨酸和磷钼酸混合液，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物而呈蓝色反应，因此蛋白质的酪氨酸和胱氨酸等可显色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。
考马斯亮蓝法测蛋白质含量
也称考马斯蓝染色法（coomassie blue staining）又称Bradford法，是 Bradford 于 1976 年建立起来的一种蛋白质浓度的测定方法。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4．按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。
注意：
考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。
适用范围
bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
采用Bradford法，即考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。原理是考马斯亮蓝在电离状态下呈现棕红色，最大吸光量为488nm。当与蛋白质结合时，它变成蓝色，并且蛋白质与色素结合时在波长595nm处吸收光最大。其吸光值与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质的定量测定。
蛋白与考马斯亮蓝在2min左右达到平衡，反应非常迅速。粘结剂在室温下保持稳定1h。该方法制备的试剂简单，操作方便，反应灵敏度高。灵敏度比Lowry法高4倍，可测定微克水平的蛋白质含量。主要的不利因素是特殊蛋白的结构和缓冲液中的干扰剂。
扩展资料：
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：
1、Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2、标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3、将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4、按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5、每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6、根据标准曲线计算待测样本的浓度。
注意：该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
参考资料来源：百度百科-考马斯亮蓝法
测定蛋白质含量的方法有哪些，其原理各是什么。
一般是测氮元素的含量，之前的三聚氰胺就是这样蒙混了质监局这关的，三聚氰胺氮含量超过60%
Bradford法测定蛋白质浓度
（一）实验原理
双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋
白质溶液测定的方法。
1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白
质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定
法。
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（?max），由465nm变为595n
m，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。
在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
Bradford法的突出优点是：
（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1?g。这是因为蛋白质与染料结合后产生
的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的
多。
（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的
过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。
因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
（3）干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不
干扰此测定法。
考马斯亮蓝法的干扰因素
去污剂,碱液,还有碱性的多糖壳聚糖。去污剂,碱液,还有碱性的多糖壳聚糖会干扰考马斯亮蓝法。Bradford法又称考马斯亮蓝法，用于快速，简便的蛋白质定量。这种定量方法在室温进行，无需特殊仪器。
考马斯亮蓝法主要是用来测定蛋白质浓度的，它的干扰因素包括：
1. 有一些物质会干扰考马斯亮蓝法，主要的干扰物质有：去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1N的NaOH。
2. Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
3. 标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用Beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。
以上就是考马斯亮蓝法的干扰因素，如果在使用过程中遇到问题，可以咨询生物领域的专业人士。
什么是考马斯亮蓝法（Bradford法）？ 生物化学实验中常用的一种鉴定方法!
是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合的一种迅速、敏感的定量测定蛋白质的方法.染料与蛋白质结合大约只需要2分钟,结合物的颜色在1小时内是稳定的,干扰物质少,灵敏度高,现已广泛应用于蛋白质含量的测定.
（Bradford法）如何测定蛋白浓度？
考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度
1、试剂：
（1）考马斯亮蓝试剂：
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤.最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250,4.7%（W/V）乙醇,8.5%（W/V）H3PO4.
（2）标准蛋白质溶液：
纯的牛血清血蛋白,根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液.
2.器材：\x0b（1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器
3、标准曲线的制作
试管编号\x050\x051\x052\x053\x054\x055\x056
100ug/ml标准蛋白（ml）\x050.0\x050.1\x050.2\x050.3\x050.4\x050.5\x050.6
0.15mol/L NaCl （ml）\x051\x050.9\x050.8\x050.7\x050.6\x050.5\x050.4
考马斯亮蓝试剂 （ml）\x055\x055\x055\x055\x055\x055\x055
摇匀,1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色\x05\x05\x05\x05\x05\x05\x05
A595nm\x05\x05\x05\x05\x05\x05\x05
以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug）,在坐标轴上绘制标准曲线.
4、样品中蛋白质含量的测定
另取两支干净的试管（做一重复）,加入合适浓度的待测样品,使其测定值在标准曲线的范围内,测定方法同上,由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量.
注意事项：
1、 如果要求严格,最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收,因为这段时间内颜色是最稳定的.
2、 若选择在旋涡混合器上混合,注意不要太剧烈,以免产生大量气泡而难于消除.
bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
采用Bradford法，即考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。原理是考马斯亮蓝在电离状态下呈现棕红色，最大吸光量为488nm。当与蛋白质结合时，它变成蓝色，并且蛋白质与色素结合时在波长595nm处吸收光最大。其吸光值与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质的定量测定。
蛋白与考马斯亮蓝在2min左右达到平衡，反应非常迅速。粘结剂在室温下保持稳定1h。该方法制备的试剂简单，操作方便，反应灵敏度高。灵敏度比Lowry法高4倍，可测定微克水平的蛋白质含量。主要的不利因素是特殊蛋白的结构和缓冲液中的干扰剂。
扩展资料：
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：
1、Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2、标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3、将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4、按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5、每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6、根据标准曲线计算待测样本的浓度。
注意：该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
参考资料来源：百度百科-考马斯亮蓝法
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。
不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。
不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。
双缩脲法和Folin—酚试剂法的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋。取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致。
扩展资料：
双缩脲法：首先利用标准蛋白溶液和双缩脲试剂绘制标准曲线，将待测血清与硫酸钠在待测试管中混合，并用只加入硫酸钠不含血清的试管作为对照，将两支试管加入等量的双缩脲试剂，充分混合后于37℃环境中放置10分钟，在540nm波长进行比色，以对照管调零，读取吸光度值，由标准曲线上直接查出蛋白质含量。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。
参考资料来源：百度百科-蛋白值测定
bradford法测定蛋白质含量的优点有哪些？
Bradford法测定蛋白质浓度\x0d\x0a（一）实验原理\x0d\x0a双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋\x0d\x0a白质溶液测定的方法.\x0d\x0a1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法）,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白\x0d\x0a质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定\x0d\x0a法.\x0d\x0a考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置（?max）,由465nm变为595n\x0d\x0am,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.\x0d\x0a在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比.\x0d\x0aBradford法的突出优点是：\x0d\x0a（1）灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1?g.这是因为蛋白质与染料结合后产生\x0d\x0a的颜色变化很大,蛋白质－染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的\x0d\x0a多.\x0d\x0a（2）测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的\x0d\x0a大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.\x0d\x0a因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.\x0d\x0a（3）干扰物质少.如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不\x0d\x0a干扰此测定法.
