本文目录一览：
- 1、bradford测定蛋白质含量的优点有哪些
- 2、大鼠肝匀浆蛋白浓度
- 3、（Bradford法）如何测定蛋白浓度？
- 4、请教Bradford法测定蛋白浓度原理及方法
- 5、测定蛋白质含量的方法有哪些，其原理各是什么
- 6、bradford法测定蛋白质含量的优点有哪些？
- 7、bradford法测蛋白浓度怎么测？
- 8、bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
- 9、bradford法测定蛋白质含量？
- 10、bca法测蛋白浓度原理
bradford测定蛋白质含量的优点有哪些
bradford法测定蛋白质浓度
（一）实验原理
双缩脲法（biuret法）和folin—酚试剂法（lowry法）的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋
白质溶液测定的方法.
1976年由bradford建立的考马斯亮兰法（bradford法）,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白
质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定
法.
考马斯亮兰g-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置（?max）,由465nm变为595n
m,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.
在595nm下测定的吸光度值a595,与蛋白质浓度成正比.
bradford法的突出优点是：
（1）灵敏度高,据估计比lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1?g.这是因为蛋白质与染料结合后产生
的颜色变化很大,蛋白质－染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比lowry法要大的
多.
（2）测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的
大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.
因而完全不用像lowry法那样费时和严格地控制时间.
（3）干扰物质少.如干扰lowry法的k+、na+、mg2+离子、tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、edta等均不
干扰此测定法.
大鼠肝匀浆蛋白浓度
目的测定联合诱导法和多氯联苯诱导法制备的大鼠肝S9的蛋白含量并对这两种方法进行比较。方法采用苯巴比妥与β—萘黄酮合并诱导所获S9作为诱导剂制备大鼠肝S9，并采用Bradford法测定所制备的S9蛋白含量。结果成功制得大鼠肝S9，并测定其蛋白含量为26.73 mg/ml。结论联合诱导法可以替代多氯联苯诱导法制备肝匀浆S9。
研究有效的S9代谢活化酶系统的制备方法，掌握用考马斯亮蓝的方法测定蛋白质的含量。方法：通过使用80mg/kg苯巴比妥钠对大鼠进行诱导（连续3～5d），停止给药后24h采样（无菌取出肝脏），制备肝匀浆，9000g速度0～4℃低温环境下离心，取出上清液（S9组分），最后加入考马斯亮蓝染色液，测定OD595nm值。通过不同浓度的标准蛋白溶液来建立标准蛋白的标准曲线，根据肝S9组分的OD595nm值计算出样品中蛋白质浓度。结果：本实验建立的标准曲线方程为y=0.0062x-0.045，相关系数为0.9887，相关性较好。测得肝S9组分样品蛋白的浓度为25.04mg/ml。结论：苯巴比妥钠作为诱导剂可以成功制备出大鼠肝S9.
（Bradford法）如何测定蛋白浓度？
考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度
1、试剂：
（1）考马斯亮蓝试剂：
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
（2）标准蛋白质溶液：
纯的牛血清血蛋白，根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液。
2. 器材： （1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器
3、标准曲线的制作
试管编号 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
A595nm
以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
4、样品中蛋白质含量的测定
另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
注意事项：
1、 如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收，因为这段时间内颜色是最稳定的。
2、 若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。
请教Bradford法测定蛋白浓度原理及方法
解：是利用蛋白质-染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。试剂和仪器一、
试剂试剂盒自备：G250
染色液、BSA标准蛋白。BSA标准蛋白浓度已稀释至500μg/ml，-20℃保存。二、
测试样品待测样品蛋白浓度稀释在50-500μg/ml范围内为宜。三、仪器96孔酶标、酶标仪。操作方法标准品编号12345678500ug/mlBSA/μl01.53612182430蒸馏水/μl3028.52724181260
分别于小离心管中混匀后，取20μl加入到对应酶标孔中待测样品编号9101112131415……待测样品稀释后，各取20μl加入到相应酶标孔中G250/μl200
μl/孔反应3-5min1.
用酶标仪测定A595nm处的吸光值。2.
根据标准曲线计算待测样品的蛋白浓度。
测定蛋白质含量的方法有哪些，其原理各是什么
Bradford法测定bai蛋白质浓度：实验原理。
双缩脲法（duBiuret法）和zhiFolin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制dao,促使科学家们去寻找更好的蛋。
取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致。
将液体混合均匀，在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于650nm波长处测定各管中溶液的吸光度值。
扩展资料：
紫外吸收法：
大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收，这是由于蛋白质中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用于测定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。
取9支试管分别标号，前8支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，1号试管不加标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，而不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致，将液体混合均匀，在280nm波长处进行比色，记录吸光度值。
参考资料来源：百度百科-蛋白质测定
bradford法测定蛋白质含量的优点有哪些？
Bradford法测定蛋白质浓度\x0d\x0a（一）实验原理\x0d\x0a双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋\x0d\x0a白质溶液测定的方法.\x0d\x0a1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法）,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白\x0d\x0a质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定\x0d\x0a法.\x0d\x0a考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置（?max）,由465nm变为595n\x0d\x0am,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.\x0d\x0a在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比.\x0d\x0aBradford法的突出优点是：\x0d\x0a（1）灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1?g.这是因为蛋白质与染料结合后产生\x0d\x0a的颜色变化很大,蛋白质－染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的\x0d\x0a多.\x0d\x0a（2）测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的\x0d\x0a大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.\x0d\x0a因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.\x0d\x0a（3）干扰物质少.如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不\x0d\x0a干扰此测定法.
bradford法测蛋白浓度怎么测？
测定：另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
注意事项：
1、 如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收，因为这段时间内颜色是最稳定的。
2、 若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。
扩展资料：
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
参考资料来源：百度百科-蛋白质测定
bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
采用Bradford法，即考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。原理是考马斯亮蓝在电离状态下呈现棕红色，最大吸光量为488nm。当与蛋白质结合时，它变成蓝色，并且蛋白质与色素结合时在波长595nm处吸收光最大。其吸光值与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质的定量测定。
蛋白与考马斯亮蓝在2min左右达到平衡，反应非常迅速。粘结剂在室温下保持稳定1h。该方法制备的试剂简单，操作方便，反应灵敏度高。灵敏度比Lowry法高4倍，可测定微克水平的蛋白质含量。主要的不利因素是特殊蛋白的结构和缓冲液中的干扰剂。
扩展资料：
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：
1、Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2、标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3、将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4、按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5、每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6、根据标准曲线计算待测样本的浓度。
注意：该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
参考资料来源：百度百科-考马斯亮蓝法
bradford法测定蛋白质含量？
bradford法测定蛋白质含量，也就是考马斯亮蓝法，其原理是考马斯亮蓝在游离状态下呈棕红色，最大光吸收在488nm; 当它与蛋白质结合后变为蓝色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。
扩展资料：
考马斯亮蓝法该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用 g-球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
参考资料来源：
百度百科-考马斯亮蓝法
bca法测蛋白浓度原理
BCA蛋白浓度检测是一个实验，是根据吸光值可以推算出蛋白浓度.碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，两分子BCA螯合一个Cu+。将该水溶性复合物在562nm处的吸收值，与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
简介
二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子，一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
实验试剂
(1) BCA试剂的配制
① 试剂A，1L：分别称取10g BCA (1%)，20g Na2CO3·H2O(2%)，1.6g Na2C4H4O6·2H2O(0.16%)，4g NaOH (0.4%) ，9.5g NaHCO3(0.95%) ，加水至1L，用NaOH或固体NaHCO3调节pH值至11.25。
②试剂B，50ml：取2g CuSO4·5H2O (4%)，加蒸馏水至50ml。
③BCA试剂：取50份试剂A与1份试剂B混合均匀。此试剂可稳定一周。
(2)标准蛋白质溶液：称取0.5g牛血清白蛋白，溶于蒸馏水中并定容至100ml，制成5mg/ml的溶液。用时稀释十倍。
