本文目录一览：
- 1、bradford法测蛋白浓度怎么测？
- 2、bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
- 3、（Bradford法）如何测定蛋白浓度？
- 4、bradford法测定蛋白质含量的优点有哪些？
- 5、bradford测定蛋白质含量的优点有哪些
- 6、请教Bradford法测定蛋白浓度原理及方法
- 7、考马斯亮蓝法测蛋白质含量是多少？
- 8、蛋白质浓度的测定
- 9、bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
bradford法测蛋白浓度怎么测？
测定：另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
注意事项：
1、 如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收，因为这段时间内颜色是最稳定的。
2、 若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。
扩展资料：
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
参考资料来源：百度百科-蛋白质测定
bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
采用Bradford法，即考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。原理是考马斯亮蓝在电离状态下呈现棕红色，最大吸光量为488nm。当与蛋白质结合时，它变成蓝色，并且蛋白质与色素结合时在波长595nm处吸收光最大。其吸光值与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质的定量测定。
蛋白与考马斯亮蓝在2min左右达到平衡，反应非常迅速。粘结剂在室温下保持稳定1h。该方法制备的试剂简单，操作方便，反应灵敏度高。灵敏度比Lowry法高4倍，可测定微克水平的蛋白质含量。主要的不利因素是特殊蛋白的结构和缓冲液中的干扰剂。
扩展资料：
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：
1、Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2、标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3、将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4、按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5、每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6、根据标准曲线计算待测样本的浓度。
注意：该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
参考资料来源：百度百科-考马斯亮蓝法
（Bradford法）如何测定蛋白浓度？
考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度
1、试剂：
（1）考马斯亮蓝试剂：
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
（2）标准蛋白质溶液：
纯的牛血清血蛋白，根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液。
2. 器材： （1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器
3、标准曲线的制作
试管编号 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
A595nm
以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
4、样品中蛋白质含量的测定
另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
注意事项：
1、 如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收，因为这段时间内颜色是最稳定的。
2、 若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。
bradford法测定蛋白质含量的优点有哪些？
Bradford法测定蛋白质浓度\x0d\x0a（一）实验原理\x0d\x0a双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋\x0d\x0a白质溶液测定的方法.\x0d\x0a1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法）,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白\x0d\x0a质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定\x0d\x0a法.\x0d\x0a考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置（?max）,由465nm变为595n\x0d\x0am,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.\x0d\x0a在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比.\x0d\x0aBradford法的突出优点是：\x0d\x0a（1）灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1?g.这是因为蛋白质与染料结合后产生\x0d\x0a的颜色变化很大,蛋白质－染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的\x0d\x0a多.\x0d\x0a（2）测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的\x0d\x0a大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.\x0d\x0a因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.\x0d\x0a（3）干扰物质少.如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不\x0d\x0a干扰此测定法.
bradford测定蛋白质含量的优点有哪些
bradford法测定蛋白质浓度
（一）实验原理
双缩脲法（biuret法）和folin—酚试剂法（lowry法）的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋
白质溶液测定的方法.
1976年由bradford建立的考马斯亮兰法（bradford法）,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白
质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定
法.
考马斯亮兰g-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置（?max）,由465nm变为595n
m,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.
在595nm下测定的吸光度值a595,与蛋白质浓度成正比.
bradford法的突出优点是：
（1）灵敏度高,据估计比lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1?g.这是因为蛋白质与染料结合后产生
的颜色变化很大,蛋白质－染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比lowry法要大的
多.
（2）测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的
大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.
因而完全不用像lowry法那样费时和严格地控制时间.
（3）干扰物质少.如干扰lowry法的k+、na+、mg2+离子、tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、edta等均不
干扰此测定法.
请教Bradford法测定蛋白浓度原理及方法
解：是利用蛋白质-染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。试剂和仪器一、
试剂试剂盒自备：G250
染色液、BSA标准蛋白。BSA标准蛋白浓度已稀释至500μg/ml，-20℃保存。二、
测试样品待测样品蛋白浓度稀释在50-500μg/ml范围内为宜。三、仪器96孔酶标、酶标仪。操作方法标准品编号12345678500ug/mlBSA/μl01.53612182430蒸馏水/μl3028.52724181260
分别于小离心管中混匀后，取20μl加入到对应酶标孔中待测样品编号9101112131415……待测样品稀释后，各取20μl加入到相应酶标孔中G250/μl200
μl/孔反应3-5min1.
用酶标仪测定A595nm处的吸光值。2.
根据标准曲线计算待测样品的蛋白浓度。
考马斯亮蓝法测蛋白质含量是多少？
考马斯亮蓝法测蛋白质含量需要根据实际样本来确定，无法一概而论。
考马斯亮蓝法测也称考马斯蓝染色法（coomassie blue staining）又称Bradford法，是 Bradford 于 1976 年建立起来的一种蛋白质浓度的测定方法。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
相关信息：
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。
其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
蛋白质浓度的测定
通常用的蛋白质浓度测定方法是Bradford 、BCA 以及在280 nm 处的光吸收。实验室倾向于选择一些特定的方法，在订购新的试剂前先试用实验室的常规方法。Brad ford法是最好的一种可以用来满足所有目的的方法。
不能直接用一种方法的结果与另一种方法进行比较，必须相对浓度来比较，例如，用Bradford 法测量到的牛血清清蛋白的量比其称量的值高两倍。
蛋白质样品的特点决定选择何种测量方法。如果知道纯化的蛋白质中没有色氨酸，就不要依赖280nm的光吸收值。如果蛋白质样品中有去污剂，就必须选择一种对去垢剂不敏感的方法，或者去除去污剂。
用任何一种方法测量未知样品都要依据标准曲线，而且每次测量时都一样。如果要知道相对蛋白质的浓度，任何纯化的蛋白质都必须选择一条参考的曲线。牛血清清蛋自(BSA) 和lgG 是通常用的参照蛋白质，除非要测量抗体，一般都使用BSA 。
BCA
工作原理：将硫酸铜加到BCA (bicinchonic acid) 的碱性溶液中，产生一种苹果绿颜色混合物，当溶液中加入蛋白质样品时， Cu2＋ 与蛋白样品中的肽键相互作用转变成Cu+，混合物的颜色转变成紫色，在562 nm下有最大吸收值。
优点：快速、灵敏、准确。
缺点：受到去污剂和有机溶剂的影响，有时间依赖性，颜色会在24 小时发生变化。
Bradford
工作原理：染料考马斯亮兰G250 在pH
优点：快速、灵敏、准确、没有时间依赖性。
缺点：去污剂的浓度不能超过0.2% ，否则会干扰测量的结果。
280 nm 光吸收值
工作原理：芳香族氨基酸，尤其是色氨酸，在280nm有强烈的光吸收。所有的蛋白质都有芳香族氨基酸（或者紫外吸收因子），在280nm有独特的消光系数。
优点：快速，样品不会受到干扰。
缺点：没有其他方法准确。
双缩脲法(Biuret)
工作原理：测量肽键，在540nm测定OD值。
优点：快速，由于盐浓度的干扰比Bradford 法小，可用于追踪蛋白质分离过程。
缺点：低浓度时测量不准确。
?Lowry (Folin-Ciocalteu) 法
工作原理：与BCA 法类似， 在750nm测定OD 值。
优点：需要很少的物质。
缺点：取决于蛋白质样品中酪氨酸的存在。
bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响
采用Bradford法，即考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。原理是考马斯亮蓝在电离状态下呈现棕红色，最大吸光量为488nm。当与蛋白质结合时，它变成蓝色，并且蛋白质与色素结合时在波长595nm处吸收光最大。其吸光值与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质的定量测定。
蛋白与考马斯亮蓝在2min左右达到平衡，反应非常迅速。粘结剂在室温下保持稳定1h。该方法制备的试剂简单，操作方便，反应灵敏度高。灵敏度比Lowry法高4倍，可测定微克水平的蛋白质含量。主要的不利因素是特殊蛋白的结构和缓冲液中的干扰剂。
扩展资料：
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：
1、Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2、标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3、将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4、按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5、每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6、根据标准曲线计算待测样本的浓度。
注意：该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
参考资料来源：百度百科-考马斯亮蓝法
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。
不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。
不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。
双缩脲法和Folin—酚试剂法的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋。取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致。
扩展资料：
双缩脲法：首先利用标准蛋白溶液和双缩脲试剂绘制标准曲线，将待测血清与硫酸钠在待测试管中混合，并用只加入硫酸钠不含血清的试管作为对照，将两支试管加入等量的双缩脲试剂，充分混合后于37℃环境中放置10分钟，在540nm波长进行比色，以对照管调零，读取吸光度值，由标准曲线上直接查出蛋白质含量。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。
参考资料来源：百度百科-蛋白值测定
